تهیه استاندارد:
یک استاندارد سهام مخلوط را با وزن دقیق (0.01 میلی گرم)) در حدود 10 میلی گرم از هر استاندارد مرجع کاوالاکتون در یک فلاسک حجمی 10 میلی لیتری آماده کنید. 7.0 میلی لیتر متانول و سونیکات را اضافه کنید تا حل شود. با متانول حجم دهید و مخلوط کنید.
توجه: از طرف دیگر ، استاندارد سهام کاوین را به روشی مشابه تهیه کنید و از فاکتورهای پاسخ کاوالاکتون برای مقابله با آن استفاده کنید.
استاندارد سهام را رقیق کنید تا حداقل یک منحنی استاندارد چهار نقطه ای ایجاد شود. رقیق استاندارد پیشنهادی سهام با استفاده از متانول 1:10 ، 1:25 و 1: 100 است.
توجه: استانداردهای فروشگاه را در دمای یخچال (0 - 5 درجه سانتیگراد) ذخیره کنید. کاوالاکتونها پس از 48 ساعت به سرعت کاهش می یابند. تهیه استانداردهای مرجع تازه قبل از هر تجزیه و تحلیل توصیه می شود.
دستگاه
· تراز تحلیلی کالیبره شده دقیق به 0.01 میلی گرم پوند
· فلاسک ، حجمی ، کلاس A ، اندازه های متنوع
· ویال ها ، کروماتوگرافی با کلاه
· سیستم کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا همانطور که در فصل USP شرح داده شده است. تأیید و مستندسازی کنید که دستگاه ، نرم افزار و سیستمهای فرعی الزامات عملکردی را برای صلاحیت نصب / عملکرد عملیاتی (IQ / OQ) برآورده می کنند.
· فیلتر ، 0.45 میکرومتر ، نایلون گلمن Acrodisc (P / N 4426) ، واتمن پورادیس ™ پلی پروپیلن (گربه شماره 6788-2504) ، واتمن GD / X شیشه (گربه شماره 6894-2504) یا Sonicator معادل
· ستون ، YMCbasic ، 5 میکرومتر ، 4.6 250 250 میلی متر (گربه شماره BA99S05-2546WT). ستون معادل ، YMC J'Sphere H80 ، 4 میکرومتر ، 4.6 250 250 (گربه شماره JH08S04-2546WT).
معرفها
· آب ، درجه HPLC یا نانوذرات
· متانول ، درجه HPLC
· استونیتریل ، درجه HPLC
· اسید فسفریک ، درجه معرف ACS
تهیه نمونه:
ماده ی گیاهی
دقیقاً (750 میلی گرم) از وزن 750 میلی گرم ساقه ، لایه برداری ، یا ریشه ریز وزن کنید.
مواد را درون یک فلاسک حجمی 50 میلی لیتری به همراه 40 میلی لیتر متانول / آب (30/70) قرار دهید. برای 60 دقیقه در دمای اتاق صوتی کنید.
بگذارید گلدان تا دمای اتاق خنک شود و با متانول / آب (70/30) حجم آن را رقیق کرده و مخلوط کنید.
نمونه را در یک ویال و درپوش HPLC فیلتر کرده و قرار دهید.
عصاره پودر و نرم (خمیر)
دقیقاً (100 میلی گرم پوند) حدود 100 میلی گرم عصاره را درون یک فلاسک حجمی 50 میلی لیتری وزن کنید. (وزن 100 میلی گرم به محتوی 50-60٪ کاوالاکتون در عصاره است.) توجه: قبل از نمونه برداری ، عصاره را با دقت همگن کنید. این کار با قرار دادن عصاره در یک ظرف غوطه ور در یک حمام آب گرم 60 درجه - 80 درجه سانتیگراد تا جریان آزاد انجام می شود.
40 میلی لیتر متانول و سونیت را به مدت 10 دقیقه یا تا زمانی که همه مواد جامد حل شوند اضافه کنید.
بگذارید گلدان تا دمای اتاق خنک شود و با متانول حجم آن را رقیق کرده و مخلوط کنید.
نمونه را در یک ویال و درپوش HPLC فیلتر کرده و قرار دهید.
نمونه پودر
عصاره کاوا غالباً مخلوط یا اسپری شده بر روی ناقلهای مختلف است. برای آزمایش موفقیت آمیز نمونه های پودر ، لازم است یک مرحله آماده سازی نمونه تهیه شود که کاوالاکتون ها را از حامل بازیابی کند. این امر می تواند با استخراج نخست با متانول یا آب خالص انجام شود.
شرایط کروماتوگرافی:
ستون: YMCbasic ، 5 میکرومتر ، 4.6 250 250 میلی متر
دمای ستون: 40 درجه سانتی گراد
نرخ جریان: 0.6 میلی لیتر در دقیقه برای YMCbasic؛ 1.0 میلی لیتر در دقیقه برای J'Sphere
فاز موبایل: اسید فسفریک ایزوکراتیک 0.1٪: ایزوپروپیل الکل: استونیتریل (64:16:20 ولت / ولت)
تشخیص: 220 نانومتر (246 نانومتر برای بهبود انتخاب)
حجم تزریق: 5 میکرولیتر
زمان اجرا: 30 دقیقه
روش:
راه حل های استاندارد مرجع و نمونه های آماده را طبق دستور تهیه کنید.
یک تزریق یک خالی از حلال استخراج کنید.
تزریق یکبار از آماده سازی استاندارد را انجام دهید.
یک نقشه خطی از مناطق قله استاندارد در مقابل غلظت های استاندارد ایجاد کنید.
تزریق منفرد از آماده سازی نمونه را انجام دهید.
غلظت کاوالاکتون را در نمونه محاسبه کنید.
تناسب سیستم:
ضریب همبستگی رگرسیون خطی باید 99/0 ≥ باشد. وضوح بین قله desmethoxyyangonin و یانگونین باید 1/1 ≥ باشد.
شرکت فناوری بیوتکنولوژی Shaanxi Y-Herb ، Ltd.